Yağ olarak bulunan lipitler, yani yağlı hidrofobik lipitler, sudan boyalarına karşı bir afiniteye sahiptir. Oil Red O, lipitler için yoğun kırmızı bir lekedir. Yağlara nüfuz etmek için boyanın çözünmesi gerekir. Organik çözücüler kullanıldığında, lipidlerin çözelti içine ekstrakte edilmesini önlemek için çözücünün yeterince seyreltilmiş (sulu) olması gerekir. En yaygın kullanılan çözücü izopropil alkoldür (izopropanol/IPA). Lipidlerin genel lokalizasyonu için, Yağ Kırmızısı O'yu nükleer bir leke takip eder. Ayrıca, bir kez boyanan doku, çift kırılmalı kolesterolü göstermek için polarize ışıkla gösterilebilir.